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这么操作昆虫elisa检测试剂盒,完美的得到你想要的结果

2018-09-26      点击:136
   这么操作昆虫elisa检测试剂盒,完美的得到你想要的结果
  
  昆虫elisa检测试剂盒操作步骤:
  
  1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
  
  2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
  
  3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
  
  4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
  
  5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
  
  6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
  
  7、温育:重复4的操作。
  
  8、洗板:重复5的操作。
  
  9、显色:每孔先加入显色剂A液50μL,再加入显色剂B液50μL,37℃避光显色15min。
  
  10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
  
  11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
  
  12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
  
  昆虫elisa检测试剂盒注意事项:
  
  1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
  
  2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
  
  3、建议昆虫elisa检测试剂盒所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
  
  4、牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。
  
  5、本试剂盒定量范围为0.1-200ng/ml,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(0.1-200ng/ml范围内),乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
  
  6、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。
  
  7、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。
  
  8、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。
  
  9、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
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