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推荐一个大鼠甲状旁腺素含量检测方法-ELISA实验

2018-09-20      362

推荐一个大鼠甲状旁腺素含量检测方法-ELISA实验

大鼠甲状旁腺素(PTH)ELISA试剂盒仅供研究使用

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠甲状旁腺素(PTH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠甲状旁腺素(PTH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

大鼠甲状旁腺素(PTH)ELISA试剂盒性能

1. 检测范围:1.25 pg/mL – 40 pg/mL。

2. 灵敏度:最低检测浓度小于0.1 pg/mL。

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

操作步骤

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

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